Kako pripremiti zalihe glicerola: 9 koraka (sa slikama)

Sadržaj:

Kako pripremiti zalihe glicerola: 9 koraka (sa slikama)
Kako pripremiti zalihe glicerola: 9 koraka (sa slikama)

Video: Kako pripremiti zalihe glicerola: 9 koraka (sa slikama)

Video: Kako pripremiti zalihe glicerola: 9 koraka (sa slikama)
Video: Kako napisati motivaciono pismo (cover letter)? 2024, Marš
Anonim

Zalihe glicerola su vrsta suspenzije koja se koristi u laboratorijskim uvjetima za skladištenje bakterijskih kultura na duže vrijeme. Kada se tečne bakterijske kulture dodaju u 50% -tnu otopinu glicerola, glicerol ulijeva u bakterijske stanice, čineći ih strukturno stabilnim i omogućavajući njihovo sigurno skladištenje. Nakon miješanja uzoraka, zamrznite ih na -80 ° C (-112 ° F) kako biste osigurali da ostanu održivi što je dulje moguće.

Koraci

Dio 1 od 3: Miješanje otopine glicerola

Priprema zaliha glicerola Korak 1
Priprema zaliha glicerola Korak 1

Korak 1. Pripremite tekuću kulturu bakterija koje želite pohraniti

Da bi zaliha glicerola bila učinkovita, mora se kombinirati s tekućom bakterijskom kulturom. Za proizvodnju tečne kulture biće potrebno da inkubirate uzorak bakterije preko noći u Erlenmajerovoj tikvici napunjenoj čorbom lizogene i odgovarajućom koncentracijom antibiotika.

  • Nakon što pripremite tekuću kulturu, možete staviti bakterije u skladište ili nastaviti s izolacijom DNK plazmida.
  • Lizogeni bujon (poznat i kao "LB bujon" i "LB tečnost") je vrsta tečnosti bogate hranljivim materijama koja se koristi za brzo razmnožavanje bakterija. Može se kupiti u maloprodaji koja prodaje laboratorijsku opremu i materijale.
  • Inkubacija bakterijskih kultura visoko je tehnički proces koji uključuje mnoge različite varijable. Iz tog razloga, najbolje ga izvodi obučeni tehničar u kontroliranom laboratorijskom okruženju.
Pripremite zalihu glicerola Korak 2
Pripremite zalihu glicerola Korak 2

Korak 2. Razrijedite čisti glicerol u destiliranoj vodi kako biste stvorili 50% -tnu otopinu glicerola

Sterilnom pipetom izmjerite 10 ml obje tekućine i spojite ih u jednu tikvicu. Tikvicu temeljito promiješajte ili protresite dok se tekućine ne ujednače.

  • Razrjeđivanje glicerola potrebno je kako se ne bi oštetilo bakterijske stanice.
  • Neki naučnici radije koriste otopinu glicerola od 15-40% kako bi izbjegli kompromitiranje bakterijske kulture. Međutim, mješavina od 50% osigurat će maksimalnu dugovječnost skladištenja.
Pripremite zalihe glicerola Korak 3
Pripremite zalihe glicerola Korak 3

Korak 3. Prenesite 50 mikrolitara 50% -tne otopine glicerola u epruvetu za mikrofugu

Pažljivo premjestite razrijeđeni glicerol u novu bočicu kako biste izbjegli prolijevanje. Ovaj isti spremnik upotrijebit ćete za ubrizgavanje otopine glicerola u tekuću bakterijsku kulturu i stavljanje uzorka u hladnjak.

Ako je moguće, upotrijebite cijev s vrhom na vijak, a ne cijev sa zatvaračem. Poznato je da se cijevi sa zatvaračem otvaraju slučajno tokom miješanja i dužeg skladištenja

Dio 2 od 3: Dodavanje bakterijske kulture

Pripremite zalihe glicerola Korak 4
Pripremite zalihe glicerola Korak 4

Korak 1. Dodajte 50 mikrolitara vaše tečne bakterijske kulture u rastvor

Svježom pipetom izmjerite jednaku količinu tekuće kulture i ulijte je izravno u otopinu glicerola u epruveti. Konačni udjeli vaše zalihe glicerola trebali bi biti 50% bakterija i 50% razrijeđenog glicerola.

  • Korištenje neproporcionalnih količina glicerola i tekuće kulture moglo bi utjecati na otpornost bakterija i smanjiti vrijeme koje ona može preživjeti u hladnjači.
  • Ako koristite otopinu glicerola s nižom koncentracijom, morat ćete prema tome prilagoditi količinu bakterijske kulture. Za više informacija pogledajte literaturu koja se odnosi na točno soj koji skladištite.
Pripremite zalihe glicerola Korak 5
Pripremite zalihe glicerola Korak 5

Korak 2. Postavite poklopac na cijev

Zašrafite poklopac na mjesto ili pritisnite prema dolje dok ne čujete tihi klik ako koristite gornju cijev. Prije nego nastavite, provjerite je li poklopac dobro pričvršćen.

Pripremite zalihe glicerola Korak 6
Pripremite zalihe glicerola Korak 6

Korak 3. Lagano protresite epruvetu da se pomiješa bakterijska kultura i glicerol

Cijev tucite nekoliko puta naprijed -natrag dok se obje tekućine ne ravnomjerno rasporede. U ovom trenutku, bakterijske stanice će polako početi apsorbirati otopinu glicerola, što će stabilizirati i zaštititi staničnu membranu od propadanja i oštećenja povezanih s temperaturom.

Palac držite čvrsto pritisnut uz poklopac cijevi za mikrofugu dok drmate kako biste bili sigurni da se neće olabaviti

Dio 3 od 3: Čuvanje i oživljavanje bakterijskih kultura

Pripremite zalihe glicerola Korak 7
Pripremite zalihe glicerola Korak 7

Korak 1. Označite uzorak bakterije

Napišite naziv kulture na malu naljepnicu epruvete ili traku maskirne trake i zalijepite je na cijev za mikrofugu gdje će biti jasno vidljiv. Također možete unijeti podatke o klasifikaciji bakterija izravno na poklopac pomoću markera sa filcom.

  • Obavezno zabilježite i sve druge informacije koje bi se mogle pokazati korisnima tokom analize, poput tačnog soja uzorka ili njegovog podrijetla.
  • Označavanje vaših kontejnera za uzorke nezamjenjiv je korak u procesu prikupljanja jer vam omogućuje da pratite njihov sadržaj dok se miješaju u skladištu i izvan njega.
Pripremite zalihe glicerola Korak 8
Pripremite zalihe glicerola Korak 8

Korak 2. Zamrznite uzorak na -80 ° C (-112 ° F)

Obeleženi uzorak stavite u prehlađen laboratorijski zamrzivač na stalnu temperaturu od -80 ° C (-112 ° F). Ako se čuva u ovim uvjetima, bakterijska kultura ostat će održiva više godina.

Od kritičnog je značaja da temperatura zamrzivača ostane fiksna na -80 ° C (-112 ° F). Ako se postavi toplije, očuvane bakterije mogu umrijeti

Pripremite zalihe glicerola Korak 9
Pripremite zalihe glicerola Korak 9

Korak 3. Sastružite malu količinu smrznute bakterije kako biste je pripremili za analizu

Kad dođe vrijeme za oživljavanje uzorka, izvadite epruvetu za mikrofugu iz zamrzivača i otvorite poklopac. Sterilnom omčom za inokulaciju, čačkalicom ili vrškom pipete prikupite malu količinu smrznutog materijala s vrha uzorka i nanesite bakterije na LB agar ploču radi ispitivanja ili testiranja.

  • Pazite da se bakterija koja se grebe ne otopi. Može vam pomoći držati cijev za zalihe na suhom ledu dok ne dovršite svoje testove.
  • Izvadite uzorak iz zamrzivača samo kada je to apsolutno neophodno. Ponovljeno odmrzavanje i ponovno zamrzavanje značajno će skratiti njegov vijek trajanja.

Preporučuje se: